Attention ; ce qui suit dévoile des éléments importants de l'intrigue.
Acte 1 : Nymphes et bergers se réjouissent du mariage du demi-dieu avec Euridice. Comme s'ils étaient conscients du drame qui guette les jeune époux, ils insistent sur l'éloignement du mauvais sort. Orphée enchante tous ceux qui l'écoutent et cherche à attirer l'attention d'Euridice en jouant avec les humains qui succombent sous son charme. Euridice, vexée par ce jeu, déclare son amour avec une indifférence simulée. Orfeo et Euridice achèvent ce jeu et s'enlacent enfin avant d'être guidés pour célébrer leur mariage. Euridice est conduite au temple.
Acte 2 : Orfeo partage son bonheur de jeune amoureux avec les bergers qui l'accompagnent. La messagère apporte soudain la funeste nouvelle : Euridice vient de succomber à la morsure d'un serpent. Orfeo est inconsolable, le chœur crie sa douleur (Ahi, Caso acerbo...) !
Acte 3 : Sperenza (l'Espérance) conduit Orfeo à la porte des Enfers. Orfeo cherche à la garder près d'elle mais Sperenza le laisse face à son destin. La première épreuve du demi-dieu est de charmer le passeur du fleuve des Enfers, Caronte, qui finit par s'assoupir au chant d'Orfeo (Possente spirto...). Orfeo traverse le fleuve.
Acte 4 : Proserpine, femme de Pluton, dieu des Enfers, avec qui elle passe une moitié de l'année, intercède auprès de son mari pour qu'il délivre Euridice. Elle tend à Pluton deux masques correspondant à Orfeo et Euridice. Pluton rappelle Proserpine à ses devoirs conjugaux. Et en échange Pluton consent à laisser Orfeo et Euridice retourner sur terre. Toutefois, Orfeo ne devra pas se retourner. Malheur ! Orfeo doute et se retourne : Euridice disparaît à nouveau dans les limbes. Le chœur des Esprits est témoin de la victoire puis de l'échec d'Orfeo.
Épilogue : De retour dans les plaines pastorales de Thrace, Orfeo se lamente. Apollon, son père, Dieu de la Beauté et du Soleil, apparaît et l'élève au ciel où Euridice est devenue une constellation. Les nymphes et les bergers chantent et dansent cette fin magique.
